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第1章 特定基因的克隆 附1.1 Bad基因介紹 實(shí)驗(yàn)1.1 從核酸數(shù)據(jù)庫中獲得mBad基因編碼序列 實(shí)驗(yàn)1.2 從細(xì)胞中提取總RNA 實(shí)驗(yàn)1.3 逆轉(zhuǎn)錄獲得小鼠B16F10細(xì)胞的cDNA 實(shí)驗(yàn)1.4 PCR擴(kuò)增目的基因mBad 附1.2 mBad基因PCR引物的設(shè)計 實(shí)驗(yàn)1.5 PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳回收 實(shí)驗(yàn)1.6 SDS堿裂解法提取質(zhì)粒DNA 實(shí)驗(yàn)1.7 用質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒制備質(zhì)粒DNA 附1.3 克隆載體的選擇 實(shí)驗(yàn)1.8 DNA的限制性酶切和酶切產(chǎn)物的回收 附1.4 酶切位點(diǎn)的選擇 實(shí)驗(yàn)1.9 連接 附1.5 平端DNA的連接反應(yīng) 實(shí)驗(yàn)1.10 轉(zhuǎn)化 實(shí)驗(yàn)1.11 陽性重組子的篩選以及測序驗(yàn)證第2章 克隆基因的表達(dá)和表達(dá)產(chǎn)物的純化 實(shí)驗(yàn)2.1 His-tag EGFP在大腸桿茵中的表達(dá)和純化 附2.1 融合蛋白表達(dá)載體pHis-EGFP的構(gòu)建及融合蛋白的親和純化結(jié)果 實(shí)驗(yàn)2.2 GST-EBFP融合蛋白在大腸桿茵中的表達(dá)和純化 附2.2 GST-EBFP的純化結(jié)果 實(shí)驗(yàn)2.3 GST-EBFP在巴氏畢赤酵母中的表達(dá) 附2.3 pPICZ C-GST-EBFP重組質(zhì)粒的構(gòu)建、鑒定 實(shí)驗(yàn)2.4 GST-EGFP在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)純化 附2.4 重組AcNPV-EGFP病毒的構(gòu)建與篩選第3章 特定基因的功能研究 實(shí)驗(yàn)3.1 用重疊延伸PCR法進(jìn)行EGFP基因的定點(diǎn)突變 附3.1 重疊延伸PCR法基因定點(diǎn)突變的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)3.2 用單管大引物PCR法進(jìn)行EGFP基因的快速定點(diǎn)突變 附3.2 單管大引物PCR法基因定點(diǎn)突變的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)3.3 mBad基因在293T細(xì)胞中的瞬時表達(dá) 實(shí)驗(yàn)3.4 western b10tting檢測瞬時轉(zhuǎn)染基因的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)3.5 人DNMT1基因干擾質(zhì)粒shRNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建 附3.3 干擾質(zhì)粒的設(shè)計 實(shí)驗(yàn)3.6 質(zhì)粒DNA的大量純化 實(shí)驗(yàn)3.7 脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞MCF-7 附3.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染結(jié)果 實(shí)驗(yàn)3.8 實(shí)時熒光定量PCR法檢測DNMT1基因mRNA表達(dá)水平 附3.5 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)3.9 利用熒光顯微鏡檢測細(xì)胞骨架蛋白β-actin在A549細(xì)胞中的定位 附3.6 A549細(xì)胞中β-actin的熒光顯微鏡照片 實(shí)驗(yàn)3.10 流式細(xì)胞儀檢測紫杉醇對A549細(xì)胞周期的影響 附3.7 紫杉醇處理對A549細(xì)胞周期的影響 實(shí)驗(yàn)3.11 流式細(xì)胞儀檢測臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖 附3.8 流式細(xì)胞儀檢測臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖 實(shí)驗(yàn)3.12 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡 附3.9 流式細(xì)胞儀檢測Jurkat淋巴瘤細(xì)胞的凋亡第4章 蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用 實(shí)驗(yàn)4.1 酵母雙雜交體系發(fā)現(xiàn)FADD與Fas的相互作用 實(shí)驗(yàn)4.2 二維電泳比較FADD和FADD-/-細(xì)胞株的蛋白質(zhì)表達(dá)差異 附4.1 SDS-聚丙烯酰胺凝膠的經(jīng)驗(yàn)配方 附4.2 2DE常見問題與解決辦法 實(shí)驗(yàn)4.3 GST pull-down驗(yàn)證FADD與Fas的相互作用 附4.3 GST pull-down驗(yàn)證FADD與Fas相互作用的結(jié)果示意圖 實(shí)驗(yàn)4.4 免疫共沉淀分析FADD與Fas相互作用的結(jié)構(gòu)域 附4.4 Fas與FADD不同結(jié)構(gòu)域相互作用的Co-IP結(jié)果示意圖 實(shí)驗(yàn)4.5 熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)(FRET)分析FADD與Fas相互作用 實(shí)驗(yàn)4.6 利用噬茵體肽庫展示技術(shù)篩選與鏈霉親和素特異性結(jié)合的氨基酸序列第5章 DNA與蛋白質(zhì)的相互作用 實(shí)驗(yàn)5.1 EMSA分析轉(zhuǎn)錄因子NF-kB與DNA結(jié)合序列的結(jié)合 實(shí)驗(yàn)5.2 染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)分析NF-kB與TRAF1基因啟動子序列的結(jié)合 實(shí)驗(yàn)5.3 報告基因檢測技術(shù)分析不同細(xì)胞中PSM_A基因的啟動子活性附錄Ⅰ 網(wǎng)絡(luò)資源附錄Ⅱ 常用儀器及供應(yīng)商附錄Ⅲ 著名生物試劑公司及其特色產(chǎn)品附錄Ⅳ 常用溶液配制附錄Ⅴ 常用工具酶附錄Ⅵ 實(shí)驗(yàn)室常用技術(shù)參數(shù)資料 第1章 特定基因的克隆 附1.1 Bad基因介紹 實(shí)驗(yàn)1.1 從核酸數(shù)據(jù)庫中獲得mBad基因編碼序列 實(shí)驗(yàn)1.2 從細(xì)胞中提取總RNA 實(shí)驗(yàn)1.3 逆轉(zhuǎn)錄獲得小鼠B16F10細(xì)胞的cDNA 實(shí)驗(yàn)1.4 PCR擴(kuò)增目的基因mBad 附1.2 mBad基因PCR引物的設(shè)計 實(shí)驗(yàn)1.5 PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳回收 實(shí)驗(yàn)1.6 SDS堿裂解法提取質(zhì)粒DNA 實(shí)驗(yàn)1.7 用質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒制備質(zhì)粒DNA 附1.3 克隆載體的選擇 實(shí)驗(yàn)1.8 DNA的限制性酶切和酶切產(chǎn)物的回收 附1.4 酶切位點(diǎn)的選擇 實(shí)驗(yàn)1.9 連接 附1.5 平端DNA的連接反應(yīng) 實(shí)驗(yàn)1.10 轉(zhuǎn)化 實(shí)驗(yàn)1.11 陽性重組子的篩選以及測序驗(yàn)證 第2章 克隆基因的表達(dá)和表達(dá)產(chǎn)物的純化 實(shí)驗(yàn)2.1 His-tag EGFP在大腸桿茵中的表達(dá)和純化 附2.1 融合蛋白表達(dá)載體pHis-EGFP的構(gòu)建及融合蛋白的親和純化結(jié)果 實(shí)驗(yàn)2.2 GST-EBFP融合蛋白在大腸桿茵中的表達(dá)和純化 附2.2 GST-EBFP的純化結(jié)果 實(shí)驗(yàn)2.3 GST-EBFP在巴氏畢赤酵母中的表達(dá) 附2.3 pPICZ C-GST-EBFP重組質(zhì)粒的構(gòu)建、鑒定 實(shí)驗(yàn)2.4 GST-EGFP在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)純化 附2.4 重組AcNPV-EGFP病毒的構(gòu)建與篩選 第3章 特定基因的功能研究 實(shí)驗(yàn)3.1 用重疊延伸PCR法進(jìn)行EGFP基因的定點(diǎn)突變 附3.1 重疊延伸PCR法基因定點(diǎn)突變的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)3.2 用單管大引物PCR法進(jìn)行EGFP基因的快速定點(diǎn)突變 附3.2 單管大引物PCR法基因定點(diǎn)突變的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)3.3 mBad基因在293T細(xì)胞中的瞬時表達(dá) 實(shí)驗(yàn)3.4 western b10tting檢測瞬時轉(zhuǎn)染基因的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)3.5 人DNMT1基因干擾質(zhì)粒shRNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建 附3.3 干擾質(zhì)粒的設(shè)計 實(shí)驗(yàn)3.6 質(zhì)粒DNA的大量純化 實(shí)驗(yàn)3.7 脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞MCF-7 附3.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染結(jié)果 實(shí)驗(yàn)3.8 實(shí)時熒光定量PCR法檢測DNMT1基因mRNA表達(dá)水平 附3.5 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)3.9 利用熒光顯微鏡檢測細(xì)胞骨架蛋白β-actin在A549細(xì)胞中的定位 附3.6 A549細(xì)胞中β-actin的熒光顯微鏡照片 實(shí)驗(yàn)3.10 流式細(xì)胞儀檢測紫杉醇對A549細(xì)胞周期的影響 附3.7 紫杉醇處理對A549細(xì)胞周期的影響 實(shí)驗(yàn)3.11 流式細(xì)胞儀檢測臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖 附3.8 流式細(xì)胞儀檢測臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖 實(shí)驗(yàn)3.12 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡 附3.9 流式細(xì)胞儀檢測Jurkat淋巴瘤細(xì)胞的凋亡 第4章 蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用 實(shí)驗(yàn)4.1 酵母雙雜交體系發(fā)現(xiàn)FADD與Fas的相互作用 實(shí)驗(yàn)4.2 二維電泳比較FADD和FADD-/-細(xì)胞株的蛋白質(zhì)表達(dá)差異 附4.1 SDS-聚丙烯酰胺凝膠的經(jīng)驗(yàn)配方 附4.2 2DE常見問題與解決辦法 實(shí)驗(yàn)4.3 GST pull-down驗(yàn)證FADD與Fas的相互作用 附4.3 GST pull-down驗(yàn)證FADD與Fas相互作用的結(jié)果示意圖 實(shí)驗(yàn)4.4 免疫共沉淀分析FADD與Fas相互作用的結(jié)構(gòu)域 附4.4 Fas與FADD不同結(jié)構(gòu)域相互作用的Co-IP結(jié)果示意圖 實(shí)驗(yàn)4.5 熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)(FRET)分析FADD與Fas相互作用 實(shí)驗(yàn)4.6 利用噬茵體肽庫展示技術(shù)篩選與鏈霉親和素特異性結(jié)合的氨基酸序列 第5章 DNA與蛋白質(zhì)的相互作用 實(shí)驗(yàn)5.1 EMSA分析轉(zhuǎn)錄因子NF-kB與DNA結(jié)合序列的結(jié)合 實(shí)驗(yàn)5.2 染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)分析NF-kB與TRAF1基因啟動子序列的結(jié)合 實(shí)驗(yàn)5.3 報告基因檢測技術(shù)分析不同細(xì)胞中PSM_A基因的啟動子活性 附錄Ⅰ 網(wǎng)絡(luò)資源 附錄Ⅱ 常用儀器及供應(yīng)商 附錄Ⅲ 著名生物試劑公司及其特色產(chǎn)品 附錄Ⅳ 常用溶液配制 附錄Ⅴ 常用工具酶 附錄Ⅵ 實(shí)驗(yàn)室常用技術(shù)參數(shù)資料