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發票合同實用13篇

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發票合同

篇1

租房開發票需要房東帶齊證件到所在地地稅局代開,所需材料稅率如下:

個人出租住宅房,代開發票時按綜合征收率6.68%計算繳納稅款,需要帶房主的身份證、購房合同、房屋租賃合同和經辦人的身份證到高新區地稅局辦理。

若出租的是網點房,需要按綜合征收率19.7%計算繳納個人所得稅,辦理時需要帶房主的身份證、房屋租賃合同和經辦人的身份證。

(來源:文章屋網 )

篇2

小規模納稅人 可去稅務局代開增值稅普通發票,一個季度不超過9萬可免交稅,3個點,不可抵扣,開多少交多少稅也可自己買稅盤開票,但是自己只能開增值稅普通發票。

一般納稅人 自己買稅盤自己開普票、專票,不可代開,17個點,可以抵扣。所有的企業剛成立下來都是小規模納稅人的,要經過申請或者是責令為一般納稅人。(圖左為增值稅普通發票,右為增值稅專用發票)

(來源:文章屋網 )

篇3

4、這時系統會對發票進行校驗,通過后就進行紅沖的實操了,可以手動紅沖,這里以一鍵紅沖為例。

5、填寫上手機或郵箱后,進行確定。

篇4

篇5

各省、自治區、直轄市和計劃單列市國家稅務局、地方稅務局:

據反映,有極少數地區稅務機關仍使用舊版發票代碼和發票號碼,導致一些納稅人和消費者取得的發票不能按規定入賬,影響了企業的正常經營。為此,特就有關問題重申如下:?

一、各地要嚴格執行《國家稅務總局關于統一全國普通發票分類代碼和發票號碼的通知》(國稅函〔2004〕521號)的規定,從2005年1月1日起,按照統一的發票代碼和發票號碼印制普通發票。?

二、各地稅務機關要認真檢查本地區執行統一發票代碼和發票號碼的落實情況。目前仍在使用舊版普通發票代碼和發票號碼的稅務機關必須立即停止使用,迅速加以糾正,盡可能減少消費者和生產企業的損失。?

三、對本通知下發后繼續使用舊版發票代碼和發票號碼的,總局將予以通報,直至追究有關領導和直接責任人員的責任。

篇6

發票是商品交易的合法憑證,也是稅收控管和稅務稽查的重要依據。而發票管理始終是稅收征管的重要內容,是實施稅收征管的基礎性工作。近年來,隨著征管制度的不斷規范、稅收執法責任制和稅收執法過錯追究制的推廣運行,普通發票管理制度日趨規范,以票管稅達到了一定的效果。但是,由于地稅發票的種類繁多,使用范圍廣泛,在發票使用、發票管理上還存在一些現實的問題。如何加強新形勢下的普通發票管理工作,更好地為稅收征管工作服務,是稅務部門必須思考和解決的問題。下面,結合普通發票管理實際,就存在的問題及管理建議談幾點看法。

一、地稅發票管理中存在的問題及原因

發票使用、管理中存在的問題,不僅造成了會計核算資料失真、導致國家稅款大量流失,還破壞了正常的經濟、社會秩序,而且敗壞了黨風和社會風氣,有悖于和諧社會建設。稅部在發票管理上做了大量細致的工作,嚴格依照稅收法律、法規努力做好發票管理工作,想盡辦法制訂并完善行業發票管理辦法,積極宣傳發票有關知識,在堵漏增收方面發揮了發票管理獨特作用,發票管理工作也取得了一定成效。但我們必須清醒看到發票管理工作仍存在較為突出的問題,主要是:

1.消費者索要發票意識還不強。因為社會稅收意識的淡薄,如消費者個人消費不需報賬,這就導致了這些個人不會主動索要發票,在餐飲業、其他服務業中,以售貨清單、收款收據等代替發票的現象較為普遍。

2.納稅人不按規定開具發票。一些納稅人買假用假,套購倒賣發票,造成稅收的大量流失和管理難度加大。這不僅嚴重違反發票管理辦法和財務管理制度規定,更影響了營業稅和所得稅的稅基。還有就是納稅人變相使用發票。一些無法列支的招待費用(如水果、食品、運費、餐費),轉開成代開統一發票入賬;建筑安裝工程結算時開具地稅部門的服務業發票;將拆遷賠償費、尾沙、污染費、制作服裝、房租、水電、打字復印等都用搬運裝卸力資發票開具,客觀上又造成了未足額征收稅款的事實。

3.利用發票引稅、買賣稅。目前很多地方面臨稅源少、任務重的復雜處境,為了完成稅收任務,有的基層單位利用發票進行引稅、買賣稅,不堅持稅收屬地原則,鄉鎮到縣城引,縣城到城市引,稅源不足的地方到稅源充足的地方引,欠發達地區到發達地區引,通過以縣、鄉、鎮名義財政返點、獎勵的形式,開展多渠道的引稅,變相降低稅率,流失了地方稅收,造成了發票管理秩序混亂。

4.假發票有時難于辨別。在發票“打假”及發票檢查活動中,對所檢查的有獎定額發票和手工版發票是否是假發票,基層稅務人員有時很難作出正確判斷,一些假發票無論從材質、印刷、大小、監制章等方面,很難辨其真偽。有的假定額發票用的是真發票的票號,所以通過簡單的電話查詢就不能判斷真假。

以上四點是目前發票管理中存在的較為突出的問題,究其原因主要有:

1.思想認識不足。從稅務部門自身來講,仍然存在“重專票、輕普票”觀念,對加強普通發票管理思想上沒有引起足夠重視,在管理上功夫下得不夠深;從納稅人來講,誠信意識不夠強,有的納稅戶違規使用發票,存在逃避稅收的現象,極大地影響了發票的公信力,使社會上假發票較猖獗。

2.發票管理法規相對滯后,理論上存在與現行狀況不相適應之處,如:定義“假發票”、對納稅人使用假發票罰則不具體等等,理論上未界定清楚,給實際工作帶來困難。

3.稅收管理員制度落實不到位,稅收管理員監管不力,對管戶實際用票量與發票限購量未進行對比,造成納稅戶稅負畸輕畸重,使民主評議稅負缺乏準確依據,“雙定”稅收不合理。

4.“雙定”稅收存在一定問題,這是主要原因。個、私納稅中小戶定稅與定購發票量、與其實際用票相差甚遠,當月超過核定用量未申購發票,定稅不合理造成納稅戶違法使用假發票。

二、進一步加強地稅發票管理的建議

上述現象嚴重違反了發票管理辦法和財務管理制度規定,更影響所得稅的稅基,造成稅收大量流失,迫切需要加以解決。

1.加大對地稅發票管理的宣傳力度。一方面要加強對納稅人如何依法使用發票的宣傳,強調發票是會計核算的唯一合法憑證,堵塞發票管理漏洞,促進納稅人加強財務管理和會計核算。另一方面對消費者要加強自我保護意識的宣傳。

篇7

郵編:_________

聯系電話:_________

乙方:_________

法定代表人:_________

住所:_________

郵編:_________

甲方特委托乙方為法律顧問,辦理有關a股發行及上市工作的法律事務。甲乙雙方經友好協商,依法達成以下條款,以資共同信守:

第一條 甲方就a股發行及上市工作所涉法律事項,按照本合同約定的條件委托乙方辦理。乙方接受委托,同意按照本合同約定條件完成受托工作,并指派_________律師為本合同項目的經辦律師。

第二條 乙方律師的工作范圍包括以下事項:

1.參與公司重組方案的制訂、協助起草公司股票公開發行及上市方案;

2.草擬、修改公司章程、股東大會決議及董事會決議;

3.與公司及其他中介機構就重大法律問題進行磋商;

4.審查與公司股票發行及上市有關的法律文件;

5.出具公司發行股票和上市法律意見書;

6.參與討論招股說明書;

7.參加公司公開發行股票及上市的其他相關法律業務。

第三條 甲方的權利義務:

1.有權就乙方服務范圍內的事項,隨時向乙方提出口頭或書面咨詢,乙方應及時作出答復;

2.根據a股發行及上市工作整體規劃,有權要求乙方修改其工作計劃及日程安排,以適應a股發行及上市工作的需要;

3.應乙方要求,提供與委托事項相關的文件資料,并保證其完整、真實、準確;

4.為乙方提供必要的工作條件;

5.按約定支付律師費。

第四條 乙方的權利義務:

1.有權要求甲方提供為完成委托事項所必需的完整、準確、真實的文件、資料,并有權對上述文件、資料進行審查和驗證;

2.有權按合同約定收取律師費;

3.在維護甲方利益的前提下,遵從法律和行業規則的要求,有權保持工作的獨立性和客觀性;

4.盡職完成本合同項下的法律事務,在法律的范圍內盡力維護甲方的權益;

5.服從甲方a股發行及上市工作的整體安排,保質保量提供法律服務,并應甲方要求隨時報告工作進度;

6.不得有損害甲方利益或故意拖延、耽擱辦理受托事項等違反律師執業紀律或職業道德的行為;

7.對甲方所提供的文件資料和所作陳述及在工作中所知和可知的信息負有保密義務。

第五條 律師費用及支付辦法:

1.合同雙方同意,甲方向乙方支付律師費_________元人民幣。

2.上述律師費,在甲方簽署本合同之日起5日內支付_________元;在a股募股資金進入甲方賬戶之日起10日內支付其余律師費。

3.如果a股發行及上市工作未能完成,甲方應按乙方根據本合同第二條已完成工作量,經雙方協商后適當支付律師費。

第六條 違約責任:

1.甲方違反本合同第三條規定的義務,致使委托事項無法完成,乙方有權終止合同,不退還依約收取的費用。

2.乙方違反本合同第四條規定的義務,甲方有權終止合同,依約收取的費用全部予以退還,并賠償由此而遭受的損失。

篇8

合同標的物具有一定價值,合同定價是其內在價值的外在反映,縱觀合同的定價方式,大致經歷了四個階段

(一)計劃價格階段

在計劃經濟下,國家實行統購統銷,各級政府有專門的計劃生產委員會制定當年的生產計劃,商品的價格是由國家根據計劃需要制定的,買賣雙方當事人沒有相互利益博弈的機會和可能性。

(二)自由定價

小平南巡講話后,改革開放的步伐加快,市場化的不斷深入,政府的經濟戰略開始轉移,由計劃轉向市場,凡是市場能夠解決的政府不再插手,于是出現了買賣自由、貿易繁榮的景象,商品的價格是由定價者根據市場規律、供需關系制定的,但是基本符合價格圍繞價值上下波動的價值規律。

(三)登記備案

對于一些特殊的商品,目前國家實行的是政府指導價格為主、商家自由定價為輔、價格備案為法定程序的定價模式,這類商品由于性質特殊,如果完全市場化,將會對社會的發展造成一定不利,因而須要給予一定的限制,例如藥品。

(四)聽證程序

隨著商品私有化貿易的不斷深入以及社會法制的進步,人們對于完全的自由定價逐漸感到不滿,于是價格聽證程序走上了歷史舞臺,關乎于民生民利的事項,要漲價先聽證已經成為了人們法律意識中的一個常識,直到現在價格聽證程序在逐漸的完善。

二、合同定價的基本原則

在市場經濟的環境下,合同定價應當遵循以下基本原則:

(一)自由定價原則

合同定價的自由原則是在市場語境下合同定價的帝王原則,是當事人意思自治的體現。從市場發展的歷史來看,自由定價的作用非同小可,國家撤消了糧食部、取消了糧票人們反而吃飽了飯;撤銷了機械工業部,中國反而成為了世界工廠。這都說明了在市場環境下,自由買賣、自由定價對產業發展的積極推動力量巨大。

(二)防止壟斷原則

雖然合同自由原則是合同定價的主要原則,但是若不加以約束,商家必然借助其技術或者市場的優勢地位獲取超額利潤,這就形成了壟斷,壟斷的結果是使少數商家獲得利益但卻是以犧牲消費者利益和技術進步為代價的,因而必須反壟斷。在這樣的思想指導下,防止壟斷原則也自然成為了合同定價原則的一個基本原則,是對合同自由原則的限制。

(三)政府干預原則

某種商品涉及民生民利或者在短時間內波動過速,必然會引起人們的消費恐慌,導致市場混亂,此時政府便會出臺一系列臨時限價政策加以規范,這樣的定價方式依然是依靠政府的力量來干預合同自由定價。例如:藥品定價;短期搶購食鹽時政府對食鹽的限價。

(四)漲價聽證原則

從程序法意義上講,要漲價先聽證已經成為涉及民生民利事項的必經法律程序,這體現了漲價程序的正當性。從實體法意義上講,漲價聽證原則是對合同自由定價原則的限制和約束,是保障價格在合理范圍內波動的一個手段。

三、旅客運輸合同定價反映出的法律問題

(一)宏觀上壟斷定價喪失法律平衡的風險

從宏觀層面上看,鐵路一直被人們稱為“鐵老大”正是因為其獨一無二的壟斷地位,在火車票的定價、漲價方面一直受到人們的譴責,尤其是鐵道部改制變為鐵路運輸公司實行公司制管理,火車票的定價問題就更加受到人們的關注。鐵路公司化后,將鐵路推向了市場,旅客車票受市場環境的制約,若火車票完全實行自由定價,則必然使鐵路公司獲得壟斷利潤,消費者的利益受到損失。因此,火車票的定價作為一種壟斷定價很容易喪失法律上的平衡,有加以約束的必要。

(二)微觀上票價結構不合理缺乏理論基礎

從微觀層面上看,目前火車票票價結構不合理即“站坐同價”問題是最受民眾詬病的問題,鐵路運輸合同屬于服務合同,不同的服務質量體現了不同的價值,理應呈現不同的價格,而“站坐同價”卻違背了這一基本的價值規律,因而缺乏理論基礎,故合理性與合法性很容易遭受質疑。

四、站票打折的必要性

“站坐同價”說明火車票定價不合理,因而對站票打著也是廣大乘客的要求,從法律層面上看也有其必要性:

(一)對同價不同質的糾正

對站票進行打折體現了在市場環境下不同的需求享受不同的服務所應當支付不同的價格,即將無座票與有座票作為兩種不同性質的服務方式來計算服務費用,符合市場價值規律。與此同時,這種區分服務的定價方式也是對鐵路運輸壟斷價格的一種限制。

(二)合理分配資源

衡量一個行業是否和諧可持續發展,最重要的指標就是看該行業的資源配置是否合理。將無座票與有座票的價格區分開來,一方面可以合理分流不同經濟能力、不同需求的乘客合理使用鐵路資源;另一方面還可以體現鐵路運輸資源使用的合理性。

五、合同定價應考慮的因素

由火車票“站坐同價”可以引申出在市場環境下如何對合同定價的問題,根據市場規律,一般可以參考以下因素:

(一)質量因素

“一分價錢一分貨”是普通民眾對產品質量與售價之間的樸素判斷,也是商家在市場上定位商品銷售渠道、銷售對象的一個根本的依據。現實中企業為了在市場中勝出獲得高額利潤,必須不斷提高產品和服務的質量,產品和服務的質量提高后銷售價格自然會提高,這是市場規律的體現。當然市場中也會出現“同價不同質”的現象,總會被市場選擇所淘汰,若商家利用壟斷地位來抵制人們對“同價不同質”的排斥,必然會使消費者的利益受到損害。因此,質量因素是市場環境下商家定價的一個最重要的因素,高質高價、低質低價是市場規律的選擇。

(二)政策因素

市場行為總的趨勢是穩定的,但是隨著特殊事件、消費心理等改變往往會發生突變,從而使產品價格發生波動。我國政府對市場調控的力度較大,隨時會根據一些客觀情況制定相應的政策,因而在對產品或服務定價時應當適當考慮政策因素,以抵御商業風險。例如:農民對農富產品定價須考慮政策因素,否則商業風險極大。

(三)社會公正因素

涉及民生民利的產品或者服務,商家尤其是國有企業在制定價格時,還應當充分考慮定價是否具有社會公正性,若不公正則必然會導致民眾對企業定價的譴責。例如:國際油價上漲我國的油價亦上漲,而國際油價回調我國的油價卻繼續保持不變,這樣的事每發生一次,百姓就會譴責一次。

篇9

一、 關于SAP系統的簡要介紹

mySAP ERP系統是德國SAP公司在全球廣泛推廣的管理軟件系統,約有120多個國家的超過19300家集團運行SAP系統。mySAP ERP系統能夠使會計的核算監督管理職能和業務緊密聯系在一起,從而使計劃、預算、監控、分析的觸角直接深入企業各個職能部門的終端,為企業的運作提供決策支持。

作為一種企業資源計劃系統,SAP系統具備兩大特點:一是基于配置而不是基于開發,最大限度降低實施的風險;二是分模塊管理,相互集成。采購收貨和基于收貨的發票校驗功能充分體現了SAP系統物流模塊和財務模塊的集成關系。

通過基于收貨的發票校驗,系統可以從采購訂單和收貨中獲取相關數量和金額的信息;完成過賬動作時,數據實時自動傳入財務會計模塊。二者通過一個中轉科目“GR/IR”(相當于物資采購科目)對清結轉,并要求財務人員完成三單包括采購訂單、收貨和發票校驗的匹配審核工作,加強了內部控制管理機制。

二、采購收貨和發票校驗模式

(一)采購收貨的模式

采購收貨按照系統配置的移動類型執行完成,例如通常以編碼101作為采購收貨的移動類型。

采購訂單收貨是執行采購訂單的一個環節,屬于采購和倉儲部門的職責范圍,系統通過自動記賬功能生成會計憑證。

(二)發票校驗的模式。收到發票后,通過發票校驗實現應付賬款掛賬。

在SAP系統中,輸入發票可以有三種模式:

1.參照采購訂單。操作人員只需要輸入采購訂單號,系統會根據采購收貨情況,自動帶入發票的數量、金額、稅率和付款條款等項目。如果實際收到的發票和默認值有差異,在容差限制額度內可以更改。

2.參照采購收貨單。這種方法同(一)的操作相似,不同之處在于輸入發票時選擇參照收貨單號。

3.不做參照,手工在財務模塊處理。這種方法不集成,由財務人員手工輸入發票項,分別計入總賬、存貨或固定資產。

本文僅考慮參照采購訂單及采購收貨單、要求基于收貨進行發票校驗的模式。

三、影響會計科目的因素

收貨及發票校驗動作完成后,系統按照預先配置設定的科目自動生成會計憑證。涉及的會計科目主要受以下因素影響:

(一)存貨計價方法

SAP比較典型的兩種存貨計價方法為標準成本價和移動平均價。

(二)收貨與發票校驗的先后次序

一種為已收到發票未收到貨的情況,發票晚于收貨,通常稱之為GNB;

另一種為已收到貨未收到發票的情況,收貨晚于發票,通常稱之為BNG。

物資采購科目在SAP系統中通常設置為“GR/IR”,主要用于收貨和發票校驗時的過渡科目。

四、采購收貨和發票校驗的集成性對財務會計的業務影響

(一)GNB/標準成本價

發票價差是發票價格和采購訂單價格之間形成的差異,計入“材料成本差異”會計科目。

(二)GNB/移動平均價

收貨時直接按采購訂單計入存貨價值;收發票時的價差,視庫存充足與否影響科目。

1.如果庫存充足,系統直接更新庫存價值;

2.如果庫存低于發票數量,按庫存比例追加到庫存價值,不足部分計入“材料成本差異”科目。

(三)BNG/標準成本價

收到發票進行校驗時,按發票金額計入“GR/IR”;收貨時按照標準成本計入存貨科目,采購訂單與發票之間的差異計入“材料成本差異”科目。

(四)BNG/移動平均價

收到發票進行校驗時,按發票金額計入“GR/IR”;收貨時按照采購訂單價格計入存貨科目,采購訂單與發票之間的差異計入“材料成本差異”科目。

五、現舉例說明如下(為賬目清晰起見,以下事例均不考慮增值稅)

標準成本價:20元/件(初始移動平均價:25元/件)

采購訂單價:23元/件 發票價格:22元/件

初始庫存數量:100件收貨:100件 發貨:120件

(一)GNB/標準成本價

收貨時:

借:存貨20×100=2 000

材料成本差異 3×100=300

貸:GR/IR 23×100=2 300

收到發票校驗時:

借:GR/IR23×100=2 300

貸:應付賬款―供應商 22×100=2 200

材料成本差異1×100=100

(二)GNB/移動平均價/庫存充足

收貨時:

借:存貨 23×100=2 300

貸:GR/IR 23×100=2 300

收到發票校驗時:

借:GR/IR23×100=2 300

貸:應付賬款―供應商22×100=2 200

存貨 1×100=100

(三)GNB/移動平均價/庫存不足

收貨時:

借:存貨23×100=2 300

貸:GR/IR23×100=2 300

發貨時的移動平均價為(25×100+2 300)/200=24元/件

借:成本或其他類科目24×120=2 880

貸:存貨24×120=2 880

收到發票校驗時:

借:GR/IR23×100=2 300

貸:應付賬款―供應商22×100=2 200

存貨1×80=80

材料成本差異1×20=20

(四)BNG/標準成本價

收到發票校驗時:

借:GR/IR 23×100=2 300

貸:應付賬款―供應商22×100=2 200

材料成本差異 1×100=100

收貨時:

借:存貨20×100=2 000

材料成本差異3×100=300

貸:GR/IR23×100=2 300

(五)BNG/移動平均價

收到發票校驗時:

借:GR/IR23×100=2 300

貸:應付賬款―供應商 22×100=2 200

材料成本差異1×100=100

收貨時:

借:存貨 22×100=2 200

材料成本差異1×100=100

貸:GR/IR23×100=2 300

每月末收貨和發票校驗完畢,會計人員通過執行SAP系統的事務碼,可以按照系統后臺配置對GR/IR科目自動進行評估結轉,分別按照貨到票未到或票到貨未到的情況結轉至應付賬款暫估或在途物資。

如果考慮增值稅發票,系統也可以通過配置稅率及其運算參數,在發票校驗過賬時自動計算,并自動檢查是否正確,予以提示性的警告信息,完全正確匹配后才可以過賬生成會計憑證。

企業在實施ERP系統上線時,需要綜合考慮本單位的采購管控需求,制訂合理的配置方案,避免采購差異過大造成的未分攤或未分配過大,確保物料賬運行平穩,系統運行的產品成本與實際成本趨于一致,為企業管理者提供決策支持。

【參考文獻】

[1] 王紋,孫健.SAP財務管理大全[M].清華大學出版社,2005.

[2] 中華人民共和國財政部.企業會計準則――應用指南[M].經濟科學出版社,2006.

篇10

Fig.1Structures of N3methyladenine (N3MeA) and N3ethyladenine (N3EtA) [HT5][TS)]

目前,DNA中3烷化腺嘌呤的檢測方法有氣相色譜質譜法(GCMS)\[8\],該方法前處理比較繁瑣,需要化學衍生化,并且靈敏度低和專一性不強;酶聯免疫法(ELISA)解決了3烷化腺嘌呤檢測中的專一性問題,但是操作過程繁瑣,結果穩定性較差\[20\]。液相色譜串聯質譜技術因其具有靈敏度高、選擇性好、操作簡便、分析結果穩定可靠的特點,成為DNA加合物研究中的理想方法\[21,22\]。Hu 等首次報導了一種在線固相萃取結合液相色譜串聯質譜同時分析DNA中7甲基鳥嘌呤、3甲基腺嘌呤和O6甲基鳥嘌呤的方法\[23\],該方法檢測7甲基鳥嘌呤、3甲基腺嘌呤和O6甲基鳥嘌呤的運行時間為12min。目前,同時檢測DNA中3甲基腺嘌呤和3乙基腺嘌呤的液相色譜串聯質譜方法還未見報道。

本實驗建立了一種同時測定DNA中3甲基腺嘌呤、3乙基腺嘌呤的液相色譜串聯質譜方法。本方法靈敏度高,穩定性好。利用本方法研究了卷煙煙氣粒相物暴露后,DNA中3甲基腺嘌呤和3乙基腺嘌呤的含量。本方法可用于臨床上評估烷基化試劑暴露后DNA的損傷程度。

2實驗部分

2.1儀器、試劑與材料

1200快速液相色譜儀(美國安捷倫公司)配備G1367D自動進樣器、G1312B二元溶劑泵、G1316B柱溫箱; API 5500 三重四級桿串聯質譜儀(美國加州應用生物系統公司),配備電噴霧電離源(ESI); 數據采集與處理在Analyst 1.5.1軟件上實現。RH20吸煙機(德國伯格瓦特公司)。

氘代3甲基腺嘌呤(d3N3MeA)、氘代3乙基腺嘌呤(d5N3EtA)、3甲基腺嘌呤、3乙基腺嘌呤(純度≥98%,加拿大Toronto Research Chemical公司); 甲醇、乙腈、氨水、乙酸乙酯和甲酸銨(美國TEDIA有限公司),DMSO(上海安普公司),所有的試劑均為色譜純,實驗中所用的水為超純水。OASIS MCX 6cc固相萃取小柱(500 mg,6 mL,Waters公司)。3R4F標準參比卷煙購自美國肯塔基大學。

2.2.3標準工作溶液的配制分別準確稱10 mg的3甲基腺嘌呤、3乙基腺嘌呤、氘代3甲基腺嘌呤和氘代3乙基腺嘌呤固體于5個10 mL容量瓶中,用乙腈定容,分別得到1 g/L的3甲基腺嘌呤、3乙基腺嘌呤、氘代3甲基腺嘌呤和氘代3乙基腺嘌呤儲備液。然后用儲備液稀釋配制不同濃度的標準溶液和工作溶液。

3結果和討論

3.1質譜條件的選擇

用蠕動泵以10 μL/min的流速連續注射,分別將50 μg/L的3甲基腺嘌呤、3乙基腺嘌呤、氘代3甲基腺嘌呤和氘代3乙基腺嘌呤標準溶液注入ESI離子源中,在正離子模式下進行一級質譜掃描,得到相應的準分子離子峰\[M+H\]+,然后對準分子離子峰進行子離子掃描,得到碎片離子信息。選取豐度較強、干擾較小的作為定量離子對。為了達到更高的靈敏度,對碰撞能量、去簇電壓等參數進行了優化。在多反應監測掃描模式下,3甲基腺嘌呤優化結果為定量離子對m/z 150/123,定性離子對為m/z 150/108,內標離子對為m/z 153/126; 3乙基腺嘌呤優化結果為:定量離子對m/z 164/136,定性離子對為m/z 164/119,內標離子對為m/z 168/137。

3.3方法學考察

分別吸取0.1,0.2,0.5,1,2,5和10 μg/L 的3乙基腺嘌呤,1,2,5,10,20和40 μg/L的3甲基腺嘌呤標準溶液各3 μL,注入LCMS/MS系統進行分離分析。3甲基腺嘌呤和3乙基腺嘌呤的線性回歸方程分別為y=0.25x+0.0238和y=0.0145x-0.00135 (y為峰面積,x為濃度),線性良好,相關系數r均大于 0.999。利用加標稀釋得到方法的檢出限,3倍信噪比對應的濃度為檢出限,3甲基腺嘌呤和3乙基腺嘌呤的檢出限分別為0.043 和0.007 μg/L。采用樣本加標的方法獲得方法回收率,總共選取了3個添加水平,每個添加水平重復測定4次,得到方法的回收率和重復性,結果見表1。3甲基腺嘌呤和3乙基腺嘌呤的回收率分別為88.0%~102.3%和98.0%~102.0%,方法精密度小于10%,證明方法的準確性和重復性結果較好。

3.4方法應用

使用本方法對卷煙煙氣暴露的DNA中3甲基腺嘌呤和3乙基腺嘌呤進行分析,結果表明,3甲基腺嘌呤含量為1.17~3.78μg/L, 未檢出3乙基腺嘌呤。 由此可見,本方法對DNA樣本檢測靈敏度高,選擇性好,適用于卷煙煙氣暴露的DNA烷基化損傷研究以及環境中烷基化試劑對DNA暴露后的3甲基腺嘌呤、3乙基腺嘌呤的生物監測。

3Hu C W, Liu H H, Li Y J, Chao M R. Chem. Res.Toxicol., 2012, 25(2): 462-470

4Swenberg J A, Dyroff M C, Bedell M A, Popp J A, Huh N, Kirstein U, Rajewsky M F. Proc. Natl. Acad. Sci., 1984, 81(6): 1692-1695

5Scherer E, Timmer A P, Emmelot P. Cancer. Lett., 1980, 10(1): 1-6

6Kopplin A, Eberleadamkiewicz G, Glüsenkamp K H, Nehls P, Kirstein U. Carcinogenesis., 1995, 16(11): 2637-2641

7Singer B. Nature., 1976, 264(5584): 333-339

8Prevost V, Shuker D E G. Chem. Res. Toxicol., 1996, 9(2): 439-444

9Chao M R, Wang C J, Chang L W, Hu C W. Carcinogenesis., 2005, 27(1): 146-151

10Hu C W, Lin B H, Chao M R. Int. J. Mass. Spectrom., 2011, 304(23): 68-73

11Beranek D T. Mutat. Res., 1990, 231(1): 11-30

12Shuker D E G, Prevost V, Friesen M D, Eberle G, Rajewsky M F, Bartsch H. Environ. Health. Perspect., 1993, 99: 33-37

13Hecht S S. Mutat. Res., 1998, 424(12): 127-142

14Caldwell W S, Greene J M, Plowchalk D R, DeBethizy J D. Chem. Res. Toxicol., 1991, 4(5): 513-516

15Tricker A R, Ditrich C, Preussmann R. Carcinogenesis., 1991, 12(2): 257-261

16Hoffmann D, Brunnemann K D, Prokopczyk B, Djordjevic M V. J. Toxicol. Environ. Health., 1994, 41(1): 1-52

17Carmella S G, Borukhova A, Akerkar S A, Hecht S S. Cancer. Epidemiol. Biomarkers. Prev., 1997, 6(2): 112-120

18Hecht S S. Mutat. Res., 1999, 424(12): 127-142

19Vineis P, Perera F. Int. J. Cancer., 2000, 88(3): 325-328

20Pan J, Awoyemi B, Xuan Z, Vohra P, Wang H T, Dyba M, Greenspan E, Fu Y, Creswell K, Zhang L, Berry D, Tang M S, Chung F L. Chem. Res. Toxicol., 2012, 25(12): 2788-2795

21Feng S, Roethig H J, Liang Q, Kinser R, Jin Y, Scherer G, Urban M, Engl J, Riedel K . Biomarkers., 2006, 11(1): 28-52

22Hu C W, Chao R M. Chem. Res. Toxicol., 2012, 25(11): 2386-2392

23Hu C W, Chen C M, Ho H H, Chao M R. Anal. Bioanal. Chem., 2012, 402(3): 1199-1208

篇11

康佳集團股份有限公司:

你公司報送的股票發行申報材料收悉。根據《中華人民共和國公司法》、《中華人民共和國證券法》的規定及《康佳集團股份有限公司第八屆股東大會決議》,我會對你公司的發行申請予以核準,現通知如下:

一、同意你公司增資發行人民幣普通股8000萬股。

二、你公司本次發行股票應嚴格按照報送我會的《招股意向書》及《發行方案》進行。

篇12

股份定向認購及回購合同

甲方:圍場滿族蒙古族自治縣盛富糧油加工有限公司(股份發行方)

法定代表人:

乙方:

身份證號碼:

鑒于:

1、甲方(以下簡稱公司)為上海股權托管交易中心有限責任公司(以下簡稱上海股交所)的掛牌公司,股權簡稱:盛富糧油,股權代碼:208737,目前公司注冊資本為1000萬元。

2、乙方為甲方的知情人,截至本合同簽署之日,乙方未持有甲方股份。

為充分發揮雙方的資源優勢,促進甲方的快速發展,籌集甲方項目資金,甲方同意參照2017年經審計的財務數據,對乙方進行定向發行股份,乙方同意參與本次定向發行。為實現本次定向發行之目的,甲、乙雙方根據相關法律法規之規定,經自愿平等協商,就本次定向發行事宜達成本合同,以資信守。

第一條

定向發行價格和數量

1.1甲方同意向乙方定向發行

股,每股發行價格為

元,乙方同意以

元/股的價格認購甲方本次定向發行的

股股份。

第二條

限售期和認購方式

2.1限售期規定

本次發行的股權限售安排采用以下第【

】種方式:

(1)股權發行無限售安排,無自愿鎖定承諾。

(2)乙方自股權登記完成后【

】個月內不得轉讓,其后由雙方另行簽訂補充合同。

(3)乙方自股權登記完成后,所持甲方本次發行的股權即鎖定,自完成登記之日起滿12

個月、24

個月、36

個月分三批解除限售,每批解除限售股權數量分別為本次認購數量的【

】%、【

】%、【

】%。

2.2支付方式:乙方應在本合同簽訂3個工作日內將認購定向發行股份的認股款

元足額匯入甲方為本次定向發行專門開立的賬戶。

2.3備案及登記手續

本次發行的股權備案及登記安排采用以下第【

】種方式:

(1)甲方在收到乙方繳納的本次定向發行的認股款后,應當聘請具有相關從業資格的會計師事務所進行驗資,并及時辦理備案手續、新增股份登記手續、工商變更登記手續等相關事宜。

(2)甲方出具相關公司確權文書,暫不進行驗資、備案、登記、變更手續。

第三條

乙方的權利

3.1自乙方資金實際到賬之日起,乙方享有《中華人民共和國公司法》賦予股東的一切權利。

第四條

聲明、承諾與保證

4.1甲方聲明、承諾及保證如下:

4.1.1甲方是合法設立且有效存續的企業法人,具有簽署及履行本合同項下義務的合法主體資格,并已取得現階段所必須的授權或批準,本合同系甲方真實的意思表示;

4.1.2甲方簽署及履行本合同不會導致甲方違反有關法律、法規、規范性文件以及甲方的《公司章程》,也不存在與甲方既往已簽訂的合同或已經向其他第三方所作出的任何陳述、聲明、承諾或保證等相沖突之情形;

4.1.3甲方將按照有關法律、法規及規范性文件的規定,與乙方共同妥善處理本合同簽署及履行過程中的任何未盡事宜。

4.2乙方聲明、承諾與保證如下:

4.2.1乙方具有完全民事行為能力和權利能力,具有簽署及履行本合同項下義務的合法主體資格,本合同系乙方真實的意思表示;

4.2.2乙方簽署及履行本合同不會導致乙方違反有關法律、法規、規范性文件以及乙方的《公司章程》,也不存在與乙方既往已簽訂的合同或已經向其他第三方所作出的任何陳述、聲明、承諾或保證等相沖突之情形;

4.2.3乙方將按照有關法律、法規及規范性文件的規定,與甲方共同妥善處理本合同簽署及履行過程中的任何未盡事宜;

4.2.4乙方承諾嚴格遵守國家法律、法規及證監會、上海股交所關于轉讓系統的相關規定及要求。

第五條

定向發行

5.1本合同簽署后乙方應按照甲方指定的日期,將足額的定向發行認繳款匯入甲方開立的定向發行帳戶。

甲方指定的賬戶:

名:

號:

開戶行:

5.2甲方主張行權的,乙方應配合甲方提供辦理驗資、工商變更登記、股份登記所必須之資料并配合辦理相關事宜。

第六條

保密

6.1雙方同意并承諾對本合同有關事宜采取嚴格的保密措施。有關本次交易的信息披露事宜將嚴格依據有關法律、法規及中國證監會、上海股交所系統的有關規定進行。

6.2雙方均應對因本次交易相互了解之有關各方的商業秘密及其他文檔資料采取嚴格的保密措施;除履行法定的信息披露義務及本次發行聘請的已做出保密承諾的中介機構調查外,未經對方許可,本合同任何一方不得向任何其他方透露。

6.3本合同無論因何等原因終止,本條規定均繼續保持其原有效力,直到本條規定的商業信息通過公共途徑即可取得為止。

6.4各方都應當促使其人、員工和代表,對對方的保密信息予以嚴格保密,未經各方一致書面同意,不得將上述保密信息予以披露(包括但不限于通過接受采訪、回答問題或調查、新聞或者其他方式)。

6.5在本合同中,“保密信息”是指本合同的存在及其內容、本合同擬議的交易以及各方就此進行的談判等內容,一方或其代表披露包括但不限于有關該方的業務、技術、發展規劃、財務情況、發展預期以及客戶等方面的情況。

保密信息不包括:

6.5.1在披露方進行披露的時候已經被接受方所掌握的信息;

6.5.2并非由于接受方的不當行為而眾所周知的信息;

6.5.3由接受方通過第三方正當獲取的信息,但該等披露須由各方事先協商;

6.5.4向披露方的專業顧問披露,但該等專業顧問就披露給其的任何信息對披露方負有保密義務。

第七條

回購約定

本合同指的回購系指本合同中乙方所投資的的甲方發行的定向股權,代表其對應的資本、資本公積、任意公積、未分配利潤及股東權利義務等。

7.1回購時間及生效

乙方有權在本合同簽訂生效【】月后的任何時間要求甲方回購本次合同所轉讓的股權,具體回購時間由乙方決定。在甲方回購資金包括溢價費劃入乙方指定賬戶之日甲方即取得所回購股權的所有權,乙方放棄上述所有權并配合甲方辦理股權回購可能涉及的各種變更和登記等法律手續。

7.2回購價格及乙方收款賬戶

雙方約定:甲方以乙方購買甲方股權款及本資金溢價費(資金溢價費按本金年___________%計算,本合同約定的時間為【】月,合計資金溢價費總計人民幣【】萬元整(大寫))的方式回購本合同中所轉讓的股權,時間以乙方資金到甲方賬戶之日起至乙方確定的回購時間為準。

7.3乙方收款賬戶信息如下

名:

號:

開戶行:

第八條

違約責任

8.1任何一方違反本合同的,或違反本合同所作承諾或保證的,或所作承諾或保證存在虛假、重大遺漏的,視為違約,違約方應依法承擔相應的違約責任。除本合同另有約定或法律另有規定外,本合同任何一方未履行本合同項下的義務或者履行義務不符合本合同的相關約定,守約方均有權要求違約方繼續履行或采取補救措施,并要求違約方賠償因此給守約方造成的實際損失。

8.2乙方因己方重大過錯未在法律規定期限內完成登記,甲方無權解除本合同。甲方無權要求甲方賠償。

8.3如果存在以下情形,甲方應于本合同終止之日起十個工作日內,向乙方返還認購價款及產生的相應利息(按照驗資賬戶內實際產生的利息為準):

(1)由于主管機關或政府部門的原因導致本協議履行不能,任何一方均有權解除本合同,雙方互不負違約責任;

(2)因為不可抗力原因導致本協議履行不能,任何一方均有權解除本合同,雙方互不負違約責任;

(3)如果本次股權發行在認購截止日實際認購沒有達到標準,或者本次股權發行未通過上海股交所相關轉讓系統備案,甲方有權解除本合同,并不負違約責任。

8.4甲方在本合同約定的時間內,沒有及時足額回購乙方所購的定向發行的股權,沒有及時足額將乙方的資金包括溢價款劃轉到賬戶的,甲方自愿按照日罰息萬分之五的比例賠償乙方,直到甲方將上述款項包括股權回購款、罰息等劃轉到乙方賬戶為止。

8.5風險揭示

8.5.1甲方系在上海股交所的掛牌企業。該系統的轉讓制度規則與上海、深圳證券交易所的制度規則存在較大差別。上海股交所不對掛牌公司的投資價值及投資者的收益作出實質性判斷或者保證。

8.5.2在認購甲方股權之前,乙方應認真閱讀上海股交所的轉讓系統業務規則等有關業務規則、細則、指引和通知,并密切關注相關制度調整。掛牌公司股票價格可能因多種原因發生波動,乙方應充分關注投資風險。

第九條

不可抗力

9.1不可抗力是指各方或者一方不可預見、不可避免并不可克服的客觀事件,包括但不限于戰爭、地震、洪水、火災、罷工等。

9.2如果一方因不可抗力事件而不能履行其任何義務,因不可抗力事件而不能履行本合同項下之義務的履行時間應予延長,延長的時間等于不可抗力事件所導致的延誤時間。聲稱遭遇不可抗力事件而不能履行義務的一方應采取適當措施減少或消除不可抗力事件的影響,并應努力在盡可能短的時間內恢復履行受不可抗力事件影響的義務。

9.3如有不可抗力事件發生,任何一方均無須對因不可抗力事件無法或延遲履行義務而使對方遭受的任何損害、費用增加或損失承擔責任。

9.4受不可抗力事件影響的一方應在不可抗力事件發生后的十日內通知對方并提供其所能得到的證據。

9.5如因不可抗力事件導致本合同無法履行達三十日,則本合同任何一方有權以書面通知的方式解除本合同。

9.6在發生不可抗力事件期間,除因不可抗力事件導致不能履行的方面外,各方應在其他各個方面繼續履行本合同。

第十條

適用法律和爭議解決

10.1本合同受中華人民共和國有關法律法規的管轄并據其進行解釋。

10.2雙方在履行本合同過程中的一切爭議,均應通過友好協商解決;如協商不成,任何一方可向有管轄權的人民法院提起訴訟。

第十一條

本合同的解除或終止

11.1若存在以下列任一情形的,本合同將解除:

(1)雙方協商一致同意解除的;

(2)發生第八條的情形致使本合同無法繼續履行的;

(3)乙方嚴重侵犯公司利益,甲方解除本合同的;

(4)乙方未按約定繳納股份認購款的,甲方有權解除本合同。

10.2本合同的解除或終止,不影響守約向違約方追究違約責任。

第十二條

附則

12.1本合同中的“元”、“萬元”均是指“人民幣元”、“人民幣萬元”。

12.2本合同經合同雙方簽字、蓋章后生效。未盡事宜,甲乙雙方可通過協商簽訂補充合同。

12.3本合同一式伍份,甲乙雙方各執一份,其余供辦理變更、備案手續使用。

12.4通知

一、除非本合同另有規定,任何一方根據本合同進行的通知或通訊可以由個人寄送、認可的快遞、傳真或電子郵件送至以下所列其他各方的地址、傳真號碼或電子郵件地址或一方根據本條規定通知其他各方的其他地址、傳真號碼或電子郵件地址。

通知被視為有效送達的日期應該按照以下規定來確定:

二、通過個人寄送的通知應被視為于個人送達之日被有效送達。

三、通過掛號信(郵資預付)寄送的通知應被視為于寄出(如郵戳所顯示)后的第________日被有效送達。

四、通過傳真寄送的通知應被視為在寄出(如發送方的傳真機記錄的傳送確認所顯示)后的當日被有效送達。

五、為通知之目的,各方的地址、傳真號碼如下所列:

甲方

收件人:

通訊地址:

郵編:

傳真:

乙方

收件人:

通訊地址:

郵編:

傳真:

12.5本合同構成各方就本合同所列事項達成的全部合同,并取代各方之間先前就上述事項做出的全部討論、記錄、備忘錄、談判、諒解和所有其它文件和合同。本合同簽署以前各方的所有文件、合同、諒解和通信均應在本合同生效的同時自動失效,但任何不披露/保密承諾除外。

12.6除非采用經各方簽署的書面形式,并經各方批準,否則對本合同的任何修改均為無效。

12.7未經另一方事先書面同意,任何一方均不得出讓、轉讓其在本合同項下的權利或在該等權利上設定擔保。

12.8如果本合同的任何規定被判無效,則該規定應被視為無效,但不影響本合同中任何其他規定的效力。各方應盡最大努力以一項有效和可執行的規定作為替代,該規定應與原規定的意圖盡可能地接近。

12.9一方無法行使或延遲行使其根據法律或本合同有權行使的任何權利,不應被視為放棄該權利,也不排除以后任何時間對該權利的行使。單獨或部分行使該權利不排除以其他方式或將來對該權利的行使或對其他權利的行使。

12.10附件構成本合同不可分割的一部分,凡有提及本合同之處均應包括附件和對本合同及附件的不時地修改和補充。

12.11本合同附件為《出資確認函》

(以下無正文)

【本頁為本合同的簽署頁】

甲方(蓋章):圍場滿族蒙古族自治縣盛富糧油加工有限公司

法定代表人或授權代表(簽字或蓋章):

乙方:(簽字或蓋章):

或授權代表(簽字或蓋章):

簽署日期:

簽署地點:

粘貼頁(劃款、收款信息)

粘貼頁(身份信息)

新零售有機生態保健功能性食用油第一品牌

扶貧項目產業扶貧、精準扶貧

環保項目既要金山銀山,也要綠水青山

篇13

DOI:10.14088/ki.issn0439-8114.2016.23.057

Abstract: A method for the simultaneous determination of 2,4-Dichlorophenoxyacetic and 6-benzyladenine in bean sprouts was developed by ultrasonic extraction and LC-MS/MS. Samples were extracted using acidulated methanol as extraction solvent,with 2 min vortex,10 min ultrasonic extraction, and constant volume by acidulated methanol,then were separated with reversed phase column and determined quantitatively with the multiple reaction monitoring(MRM) mode and electrospray ionization(ESI+/-). The standard recovery tests showed that the additive concentration of 2,4-Dichlorophenoxyacetic were 5,10,20 μg/kg respectively, the additive concentration of 6-benzyladenine were 5,10,20 μg/kg respectively,and the average recovery was in the range of 85.0%~105.3%, the relative standard deviations(RSDs) was in 1.0%~3.2%,and the limit of detections of 2,4-Dichlorophenoxyacetic and 6-benzyladenine was 1 μg/kg and 2 μg/kg respectively. The method was rapid, convenient and cut down pretreatment time of samples, suitable for the rapid determination of large batch samples.

Key words:2,4-Dichlorophenoxyacetic;6-benzyladenine;liquid chromatography-tandem triple quadruple mass spectrometry; bean sprouts

6-芐基腺嘌呤(6-benzylarninopuring,6-BA)是一種人工合成的細胞分裂素,結構見圖1。為白色或類白色晶體,難溶于水,微溶于乙醇,在酸、堿中穩定。具有抑制植物葉內葉綠素、核酸和蛋白質分解的作用,主要用于糧食、果樹栽培和園藝,作物各個生長階段都可應用[1]。6-BA目前被廣泛用作無根豆芽的生長調節劑。人體攝人過多6-BA會刺激皮膚黏膜,造成食道、胃黏膜損傷,出現惡心、嘔吐等F象[2]。中國將6-BA作為允許使用的食品添加劑,但尚未建立食品中6-BA殘留檢測的國家標準檢測方法。豆芽樣品中6-BA殘留檢測方法主要有高效液相色譜法、液相色譜-串聯質譜法、氣相色譜法等[3-5]。根據6-BA的性質,目前前處理技術多為酸化甲醇提取目標物供液相色譜或質譜進行測定。

2,4-滴(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D),化學名2,4-二氯苯氧乙酸,結構見圖1。不同濃度的2,4-D應用也不同,在高濃度時可殺死雙子葉植物,常用作田間的除草劑。中、低濃度時可以調節植物生長,可防止落花落果、誘導無子果實形成和保鮮果實[6]。2,4-D檢測方法沒有相關的國家標準,已報道的檢測方法有氣相色譜法、離子色譜法、液相色譜串聯質譜法[7-12]。

結合6-BA和2,4-D的性質,本研究建立一種快速、方便的LC-MS/MS同時檢測方法,適用于大量樣品的快速篩查。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

液相色譜-串聯三重四級桿質譜(Agilent 1200-6410B,配有電噴霧離子源ESI,美國安捷倫公司);色譜柱ZORBAX-C18,2.1 mm×50 mm,3.5 μm(美國安捷倫公司);渦旋振蕩器XW-80A(上海精科實業有限公司);超聲清洗儀+SK250H(上海科導超聲儀有限公司);0.22 μm聚四氟乙烯過濾頭(上海安普科學儀器有限公司)。

甲醇(默克)、甲酸(默克)均為色譜純,試驗室用水均為超純水。2,4-D,6-BA標準物質均購于中國標準物質中心。

1.2 色譜質譜條件

色譜柱為ZORBAX-C18(2.1 mm×50 mm,3.5 μm,)美國安捷倫公司;柱溫35 ℃;進樣體積10 μL;流動相A0.1%甲酸水溶液;流動相B甲醇;等度洗脫A∶B=10∶90。流速為0.2 mL/min。

電噴霧電離負離子模式ESI(2,4-D),正離子模式ESI(6-BA);多反應監測掃描(MRM);分段檢測,0~3.2 min排廢液,3.2~4.3 min正離子模式掃描(226.3/91.1、226.3/148.2);4.3~7.0 min負離子模式掃描(221.1/163.2、221.1/124.9)。離子源溫度350 ℃;氣流量入10 L/h,倍增電壓4 000 V。

1.3 樣品前處理

準確稱取粉碎豆芽5.00 g于50 mL聚丙烯離心管中,量筒加入10 mL酸化甲醇提取,渦旋2 min,再超聲提取10 min,5 000 r/min離心10 min,上清液轉入25 mL容量瓶中,樣品加10 mL酸化甲醇重復提取一次。合并上清液并用純水定容至刻度,經0.22 μm水相濾膜過濾,上清液供LC-MS/MS分析。

1.4 標準溶液配置

分別稱取2種植物生長調節劑標準物,并用甲醇溶解、定容,配制2種植物生長調節劑的混合標準溶液,濃度為1.0 mg/mL。

2 結果與分析

2.1 質譜條件優化

用甲醇稀釋儲備液,配制濃度為0.1 mg/L混合標準溶液。在質譜上先進行全掃描,ESI(+)模式下得到6-BA的分子離子峰,ESI(-)模式下得到2,4-D的分子離子峰,母離子分別為221.1、226.3,應用SIM和Product Ion模式確定2種植物生長調節劑的定量和定性離子及相應的質譜參數,見表1。2種植物生長調節劑的質譜裂解規律見圖2。

2.2 前處理條件優化

2.2.1 不同提取劑的影響 考察環己烷、正己烷、甲醇、乙腈、酸化甲醇、酸化乙腈和1%甲酸水溶液提取效果。在5.00 g樣品中加入20 μg/L添加劑混合標準樣溶液2.0 mL,待溶液完全被樣品吸收后,分別用環己烷、正己烷、甲醇、乙腈、酸化甲醇、酸化乙腈和1%甲酸水作為提取溶劑,按照“1.3”方法進行樣品前處理,應用“1.2”的色譜質譜條件上機測定。結果表明,1%甲酸水、環己烷、正己烷幾乎無法提取目標物。甲醇、乙腈提取率在40%~50%之間,酸化甲醇提取率為90.5%,酸化乙腈的提取率為80.2%。因此,采用酸化甲醇作為提取溶劑。

2.2.2 提取時間的影響 考察了相同頻率下,超聲波提取時間的對提取效果的影響。提取時間分別為2、5、10、20、30 min時,5種混標的回收率分別為85.3%,87.6%,87.1%,88.1%,87.4%。從數據上分析超聲波提取時間對2種植物生長調節劑的提取影響不顯著,超聲5 min以上提取率已基本穩定。選擇超聲波提取時間為5 min,可滿足分析要求。

確定樣品的處理為酸化甲醇超聲波提取時間為5 min,2種植物生長調節劑混標(10.0 ng/mL),測得的質譜見圖3。

2.3 線性方程、檢出限

配制一系列含2,4-D和6-BA混合標準溶液,濃度范圍在0.1~1 000.0 ng/mL之間。在優化的試驗條件下進行測定,以峰面積為x,對應各組分的濃度為y作圖。試驗結果表明,2,4-D在0.1~50.0 ng/mL范圍內呈線性;6-芐基腺嘌呤在0.2~50.0 ng/mL范圍內呈線性關系,其線性方程和相關系數見表2。

采用空白基質加標進行測量,以信噪比S/N=3的含量為方法的檢出限(LOD),以信噪比S/N=10的含量為定量限(LOQ),2種植物生長調節劑的檢出限和定量限見表2。

2.4 回收率及精密度

在優化試驗條件下,選用陰性的豆芽分別添加3個濃度水平的植物生長調節劑混合標準溶液,每個添加水平平行測定6次,結果見表3。2種植物生長調節劑的平均回收率為85.0%~105.3%,相對標準偏差(RSD)小于5.0%,方法的準確度與精密度均滿足日常監測要求。

3 結論

建立了豆芽中2種植物生長調節劑的高效液相色譜-串聯質譜測定方法。利用酸化甲醇為提取溶劑,采用超聲提取,應用高效液相色譜-串聯質譜的ESI正負切換模式同時測定豆芽中2種生長激素,2,4-D、6-BA檢出限分別為1.0、2.0 μg/kg。該方法前處理簡單,應用儀器的MRM模式,大大降低了干擾,適合進行大批量樣品的測定。

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