引論:我們?yōu)槟砹?篇飼料產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分研究范文,供您借鑒以豐富您的創(chuàng)作。它們是您寫作時的寶貴資源,期望它們能夠激發(fā)您的創(chuàng)作靈感,讓您的文章更具深度。
1.當(dāng)前轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的標(biāo)志管理現(xiàn)狀
每個國家對于飼料轉(zhuǎn)基因成分有著不同的規(guī)定及管理,其中主要包含自愿標(biāo)識以及強(qiáng)制性標(biāo)識兩個種類。在1997年,歐盟首先實(shí)施了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的標(biāo)識制度,之后在50多個國家和地區(qū)中先后頒布了標(biāo)識制度。除了美國、加拿大以及阿根廷等國家以外,很多國家都應(yīng)用了強(qiáng)制性標(biāo)識的制度,其閾值范圍從歐盟0.9%直到日本的5%。我國于2002年發(fā)表了對于轉(zhuǎn)基因生物進(jìn)行管理的辦法,及時批被列入到標(biāo)志管理的目錄有大豆類產(chǎn)品,如種子、油和豆粉等;玉米類產(chǎn)品如玉米粉和油等;還有油菜籽、棉花類產(chǎn)品等。面對眾多的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品,行之有效的檢測方式以及精準(zhǔn)的定量描述是轉(zhuǎn)基因標(biāo)志制度的基礎(chǔ)。因?yàn)閷ζ溥M(jìn)行測定方式的依據(jù)存在不同的基準(zhǔn)物質(zhì),并且飼料加工會包含很多的轉(zhuǎn)基因作物等,對轉(zhuǎn)基因成分含量進(jìn)行檢測和相應(yīng)的表示方式會存在一定的差異,即使是相同的數(shù)值也很有可能表示不同的含義,因此直接給出相應(yīng)標(biāo)志的工作存在一定的困難。
2.1生物分析法
生物分析法為利用轉(zhuǎn)入目的基因進(jìn)行表達(dá)的特殊性狀,對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)行鑒定的一種方法。例如:含有β-胡蘿卜素的轉(zhuǎn)基因水稻、甜度高但是糖份含量低的玉米。利用這樣的形式,可以有效實(shí)現(xiàn)對原料進(jìn)行及時步篩選,但因?yàn)楹芏噢D(zhuǎn)基因當(dāng)中表達(dá)出的特殊性,如抗病蟲害等在作物生長中的體現(xiàn),不能用在實(shí)驗(yàn)室的檢測當(dāng)中。
2.2DNA檢測法
2.2.1核酸的提取純化。對核酸進(jìn)行提取的目的是為后續(xù)提供合理的DNA分析。DNA的質(zhì)量涵蓋對DNA分子平均長度、化學(xué)純度以及DNA序列、雙螺旋性的提取等。在對DNA進(jìn)行提取的過程中,要對能夠抑制PCR反應(yīng)蛋白質(zhì)、纖維素等進(jìn)行棄除。依照GB/T19495.3-2004可以得出,對不同DNA進(jìn)行提純的方式,可以應(yīng)用在不同的樣品中。當(dāng)前,可以提取在飼料當(dāng)中進(jìn)行應(yīng)用的轉(zhuǎn)基因成分的核算,有很多種方式,其中有三氯甲烷法、聚乙烯吡咯烷酮法、硅土法及胍-三氯甲烷法、CTAB法。并且對于這幾種方式的應(yīng)用,已經(jīng)在對飼料樣品的檢驗(yàn)中取得了成功。在這幾種方法中,對于CTAB的應(yīng)用,更多的應(yīng)用在了對飼料樣品的DNA提取中,并且成功應(yīng)用在了提取玉米、菜籽粕以及大豆蛋白的DNA中。但是,為了能夠更好的保障提取的DNA質(zhì)量,對各個樣品進(jìn)行提取的具體方式,要依照不同作物的成分特征,結(jié)合DNA的具體提取原理和以往的經(jīng)驗(yàn)對其進(jìn)行合理的改進(jìn),并將各種方式進(jìn)行比較和對比,挑選出的提取方法。例如:如果提取的樣品含有很高的鹽分,可用清水清洗幾遍;魚骨粉等要先將雜質(zhì)去除,之后在應(yīng)用CTAB法對樣品進(jìn)行制備。
2.2.2定性PCR法。該項(xiàng)方式的原理為,利用篩選樣品目標(biāo)的核算序列以及定性分析異性檢測,在對照合理以及檢測下限合適的狀況下,實(shí)施定性檢測的結(jié)果要對樣品是否為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)行明確的判斷。此種檢測方式包括擴(kuò)增目標(biāo)序列、檢測及擴(kuò)增片段特異性的確證。這種檢測的方式具有極強(qiáng)的靈敏性,并且簡便快速,是對GMF進(jìn)行檢測的方式,但該項(xiàng)方式的應(yīng)用容易產(chǎn)生假陽性的結(jié)果。所以,一般需要通過其它的方式進(jìn)行驗(yàn)證,如應(yīng)用PCR的產(chǎn)物與PCR凝膠回收的產(chǎn)物,利用凝膠電池實(shí)施檢測。借助對限制性內(nèi)切酶切的具體分析,以及序列和雜交的分析等方式實(shí)施確認(rèn)。在應(yīng)用實(shí)時熒光PCR的方式實(shí)施檢測的過程中,要對擴(kuò)增和檢測一同進(jìn)行。使用以及存在的問題有:利用PCR法定性來檢測飼料當(dāng)中的轉(zhuǎn)基因成分是當(dāng)前應(yīng)用最廣泛的鑒定形式,并且該種方式在對轉(zhuǎn)基因大豆、小麥和玉米的檢測研究中獲得了非常大的成功。我國分別制定了NY/T675-2003《轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測大豆定性PCR方法》標(biāo)準(zhǔn),可應(yīng)用在轉(zhuǎn)基因抗草甘膦大豆以及相關(guān)的產(chǎn)品中、轉(zhuǎn)基因抗草丁膦大豆和相關(guān)的產(chǎn)品等,涵蓋大豆的種子、豆粕和大豆粉等相關(guān)制品的轉(zhuǎn)基因成分定性PCR的具體檢測;SN/T1196-2003《玉米種轉(zhuǎn)基因成分定性PCR檢測方法》標(biāo)準(zhǔn),可應(yīng)用在對玉米MON810、Bt11、Event176、T14/T25、CBH351、GA21品系對其轉(zhuǎn)基因成分的相應(yīng)檢測;SN/T1943-2007《小麥中轉(zhuǎn)基因成分PCR和實(shí)時熒光PCR定性檢測方法》標(biāo)準(zhǔn),可以應(yīng)用在小麥中轉(zhuǎn)基因成分PCP的定性檢測以及實(shí)時熒光PCR的定性檢測中。對于飼料而言,轉(zhuǎn)基因成分當(dāng)中的外源基因通常包括三個關(guān)鍵的構(gòu)成部分:調(diào)控、目的和標(biāo)記基因。在這三個關(guān)鍵的構(gòu)成部分中,調(diào)控基因包含啟動子以及終止子等。根據(jù)選擇用作模版不同的外源基因,PCR定性檢測實(shí)驗(yàn)可分為不同的兩類。如果應(yīng)用靶序列擴(kuò)增的基因(包括啟動子和外源基因)該實(shí)驗(yàn)會具有良好的專一性。如果應(yīng)用的DNA序列在植物當(dāng)中存在較多的序列,如35S啟動子等,則該實(shí)驗(yàn)并不具有專一性,該項(xiàng)擴(kuò)增可以檢測不同類的多種轉(zhuǎn)基因飼料,檢測的最終結(jié)果可能會出現(xiàn)假陰性或者假陽性,所以需要應(yīng)用其它的方式驗(yàn)證。當(dāng)前,對于該項(xiàng)檢測方式的應(yīng)用雖然比較廣泛,但是還存在一些問題。首先,對于該種方式需要應(yīng)用的試劑和設(shè)備等需要支付高額的費(fèi)用,檢測的方式非常繁雜,會消耗大量的時間和精力,需要很高的操作要求等。其次,該項(xiàng)方式在一定程度上會出現(xiàn)假陽性以及假陰性的結(jié)果。所以,對于多個基因成分進(jìn)行檢測時需要對轉(zhuǎn)基因成分進(jìn)行單獨(dú)鑒定,其工作量會非常大。
3.飼料中轉(zhuǎn)基因成分的定量檢測方法
應(yīng)用熒光定量PCR法。對于該項(xiàng)檢測方式的應(yīng)用,可對PCR的過程進(jìn)行實(shí)時監(jiān)測,以便得到定量以及定性的結(jié)果,可在閉管的環(huán)境下操作,整個檢測過程只需要很短的時間,操作非常方便,比較容易進(jìn)行推廣。所以,在實(shí)際的檢測中,該項(xiàng)檢測方式成為了重要的檢測技術(shù)。該項(xiàng)技術(shù)的應(yīng)用原理為:在定量檢測PCR的體系反應(yīng)中,除了對特異的引物進(jìn)行應(yīng)用以外,還提升了與模版DNA匹配、兩端含有熒光基團(tuán)標(biāo)志的探針。PCR酶在經(jīng)歷了一次循環(huán)之后,會構(gòu)成全新的鏈數(shù),并與釋放出來的熒光基團(tuán)數(shù)呈現(xiàn)出彼此對應(yīng)的關(guān)系。當(dāng)熒光信號的實(shí)際強(qiáng)度大于規(guī)定的閾值時,便會檢測出熒光信號,這時的PCR循環(huán)數(shù)為ct值。
4.結(jié)語
由于轉(zhuǎn)基因技術(shù)的高度發(fā)展,其數(shù)量和種類正在逐步提升。當(dāng)今的飼料產(chǎn)品中包含了大量的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品,為了對其危害性進(jìn)行進(jìn)一步控制,要對飼料實(shí)施定性以及定量分析,找出存在的問題,對飼料進(jìn)行嚴(yán)格管理。